10个技巧优化移液结果

如何移液——10个技巧

苦于移液结果不准确?以下技巧能帮助您立刻优化移液结果!

  • 确保移液器、枪头和液体均处于室温(如实验允许)
  • 以一致的角度握持移液器,角度不应超过20度
  • 预润湿,进行3次标称容量的吸取和分液
  • 在最佳量程范围内进行移液(空气置换式移液器为标称容量的35-100 %)
  • 将枪头浸入液体表面正下方2-3毫米处进行吸取
  • 每次分液后都进行接触分离
  • 弃置首次和末次分液
  • 粘性液体应以较慢的速度使用“反向移液”模式进行转移
  • 挥发性液体应使用“反向移液”模式快速完成转移
  • 如果液体的密度与水差距显著,则需要重新校准移液器
     

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Poster about pipetting best practices

开始前

1. 确保温度平衡

如果实验允许,移液器、枪头及液体必须平衡至室温。

注意:温度差异会导致移液枪头和移液器内部的气垫体积收缩或膨胀,将对分液的准确性和精度产生负面影响。

temperature

如何移液

2. 保持一致的移液器角度

在整个移液过程中,尽可能以一致的角度握持移液器。角度不应超过20度。

注意:角度变化的同时,枪头内部的液体静压力也会随之改变,导致吸取量不一致。最大20°

single channel pipette hold straight and at an angle of 20 degrees

3. 如何吸取

最好将移液枪头浸入液体表面正下方2-3毫米处以吸取所需的体积。

注意:枪头浸入过深会增加液滴附着在枪头外部的风险。留在枪头外部的液体可能造成分液不准确。

pipette tip immersed just below the liquid's surface in a well

4. 分液后的接触分离

分液后,使用以下3种方法之一将移液器从目标容器中取出。

侧壁接触分离
(标准方法)使枪头末端沿容器侧壁向上滑动取出移液。此法是达到最精准分液的推荐方法。

液面接触分离
通过接触容器内液体表面使液滴分离取出枪头。推荐分液量小于1µL时使用以保证液体完整。使液滴接触液体会将小液滴从移液枪头中吸出,从而确保精准的分配。

液面下分液
如果直接在液面下进行分液,则可认为是湿式分液,不需要接触分离。适合微量分液,可避免液体残留于容器侧壁。

注意:分液后,残留的液体往往会附着在枪头末端。以下技巧可使残留液体脱离枪头。

pipette tip performing a side wall touch off, a surface touch off and an into liquid dispense

优化移液性能

5. 预润湿

为移液器装载枪头后,进行3次标称容量的吸取和分液。这样可以平衡温差并润湿移液器和枪头内部的气密空间。

注意:省略预润湿过程时,最初的几次分液往往会因蒸发而使实际分液量减少。此外,蒸发也是枪头末端形成液滴的原因之一——随着蒸气压的升高,液体将被挤出枪头。

empty pipette tip and pipette tip with liquid inside

6. 优化量程范围

称量体积在标称容量的35%到100%之间时,空气置换式移液器可表现出最佳的性能。

注意:最佳量程范围内的移液操作对技巧的依赖性较小,并可减少与操作者相关的移液错误。

pipette tip with liquid inside

7. 弃置首次和末次分液

当分配多个等分试样时,建议弃置连续分液的首次和末次分配。

注意:因为首次和末次分液的误差最大,所以不应用于试验。弃置末次分配尤其重要,因为末次分液包含了此前所有分液步骤的累计误差。

8. 粘性液体移取

粘性样品应以较慢的速度使用“反向移液”模式进行吸取和分液。

注意:较小的移液枪头孔径和气柱的弹性可防止粘性样品被快速吸取和分配。粘性液体还会粘附在枪头内壁上,使枪头很难彻底排空。“反向移液”模式会吸取选定体积外加一次额外分配的液体,用于补偿液体的残留。额外的分配将被弃置。

9. 挥发性液体移取

预润湿移液枪头可润湿气密空间。挥发性溶液应使用“反向移液”模式快速移液。

注意:如此可以最大限度地减少蒸发。“反向移液”模式将吸取更大的样品体积,以最大程度地减少蒸发对实际所需分液量的影响。

10. 根据液体密度进行校准

当处理水溶液以外的液体时,可能会发生明显的移液错误。如果液体的密度与水差距显著,则需要重新校准移液器。

注意:出厂前,移液器通常都在室温下使用蒸馏水进行过测试和校准。移取密度不同的液体时可能导致分液不准。

pipette tip with liquid inside