常用的HLA分型方法有很多，本文将探讨这些方法，以及ASSIST PLUS移液工作站如何通过实现多通道移液的自动化来提高结果的精准度和可重复性，解放实验室员工的时间。

Terasaki板中的血清学HLA分型

在HLA血清学分型中，通常使用抗体来区分HLA抗原的不同变体。一组 HLA 特异性抗体将与供体血清混合，以测试是否存在免疫反应，并确定细胞表达了哪些 HLA 类型。在移植之前，通过最终交叉匹配进行血清学分型可以筛选已存在的抗体，以比较受体和供体的 HLA。在该过程中，患者的血清将与供体的淋巴细胞混合。

在这两种应用中都使用了一种被称为Terasaki板的特殊孔板。它有60或72个孔，每孔容量约10 µl，并使用了矿物油以避免分配在孔板上的样品蒸发。将如此微量的样品精准地移入位于每孔中心的油滴中是非常困难的，即使对于最有经验的实验室技术人员来说也并非易事。VOYAGER可调枪头间距移液器可与ASSIST PLUS联用，即使对于规格独特的Terasaki板，也可实现该过程的自动化。自动化可确保移液枪头每一次的精确定位，以一致的浸入深度和速度准确、精密地分配微量样品。为了最大程度地提高效率，INTEGRA提供了为该应用专门设计的适配器，允许使用者并排处理最多2块Terasaki板，通量更高，无人值守时间更长。

基于ELISA和Luminex® 的HLA分型

血清学分型也可以以 ELISA 的形式进行，以确定供体 HLA 和受体抗体之间的反应性。相较于标准的ELISA，Luminex技术是一种基于磁珠的免疫分析系统，可同时检测多达100种分析物，为HLA检测提供更高的灵敏度和特异性。因此，该方法已经成为了全球实体器官移植中确定供体特异性HLA特异性抗体的临床标准。

 

ELISA和Luminex试验都是基于多孔微孔板的分析（通常在96孔板中进行），可以使用VIAFLO电动多通道移液器来实现高效地处理。只需将移液器装入ASSIST PLUS，即可实现ELISA步骤的自动化，为繁忙的临床实验室解放宝贵的时间，并尽可能地减少结果中的操作员间差异。这些免疫分析中所有繁琐的移液步骤（孔板包被、样品转移、添加检测抗体以及终止反应）都可以通过ASSIST PLUS移液工作站轻松实现自动化。详细的应用纪要可点此浏览.

分子HLA分型

临床分子分型策略是在明显存在血清学无法区分而只能通过查看潜在基因来区分的HLA变体时被开发出来的。常用的基于测序的HLA分型流程有很多，包括PCR序列特异性引物（PCR-SSP）、PCR序列特异性寡核苷酸探针（PCR-SSOP）、PCR测序分型（PCR-SBT）以及二代测序（NGS）。所有分子HLA分型方法都始于从样品中分离核酸，然后使用PCR扩增感兴趣的目标区域，即完整HLA区域、全长基因或者某些HLA外显子。由于HLA系统是一个长达3,600kb的庞大基因复合体，一份样品的分型往往需要多次PCR反应。

INTEGRA提供了使用ASSIST PLUS移液工作站进行样品核酸提取的优化系统，且能够为分子HLA分型自动构建PCR体系，显著缩短动手操作时间，降低每个样品的总成本。大量样品的高效分型也是可行的，因为即使是384孔板中的PCR体系构建也可以轻松实现自动化。通过ASSIST PLUS将VOYAGER可调枪头间距移液器自动化后，存储在试管中的样品可使用多通道并行加入微孔板，确保微量样品的准确、精密操作。除此之外，将该组合与INTEGRA的多通道试剂储液槽相结合，能够尽可能地减少昂贵试剂的消耗，因为该储液槽的SureFloTM防封闭矩阵提供了市面上最低的死体积。若需要，用户可以使用适用于储液槽和96孔或384孔PCR板的冷却适配器以确保样品在试验制备的过程中保持冷藏。

对于SBT和NGS方法，在PCR步骤之后必须进行扩增物的定量和纯化，一般是采用磁珠纯化。ASSIST PLUS灵活的台面布局允许用户放置磁性板以实现纯化过程中繁琐移液步骤的自动化。通过对枪头浸入深度、移液速度以及枪头角度等移液设置的优化能够最大限度的提高样品回收率。这可以确保样品孔中一致的枪头定位以尽可能降低干扰或携带磁珠的风险，为下游的测序分析提供较高的样品产能和纯度。

总结

如果患者和捐赠者不匹配，HLA分型过程中的人为错误或液体操作不精准可能导致严重的后果。工作流程的自动化能够尽可能地降低这些风险。相比于手动工作流程，使用ASSIST PLUS移液工作站意味着微量样品能够以更高的准度和精度进行移液，这在样品量小且珍贵的情况下格外重要。将ASSIST PLUS与INTEGRA的25款电动多通道移液器（提供各种体积和移液通道数）相结合，您就可以不再仅仅局限于一种HLA分型方法，而是能够根据您的工作流程需要轻松地切换不同的处理方法和应用。通过在ASSIST PLUS上将VOYAGER可调枪头间距移液器自动化，即使是Terasaki板或试管架也可以处理，进而提高效率。这让ASSIST PLUS成为了一款适用于希望提高HLA分型产能的诊断实验室和输血与移植中心的多功能工具。