Conseils d'experts : la distribution de réactifs pour les tests MTT

· Actualités Produits

Conseils d'experts : la distribution de réactifs pour les tests MTT

Gerald Posch, biotechnologue et chef de produit chez INTEGRA Biosciences, est spécialisé dans l'optimisation des détails souvent négligés, mais pourtant importants qui affectent l'issue des expériences. Gerald Posch a obtenu son master et son doctorat à l'Université des ressources naturelles et des sciences de la vie de Vienne, où il a étudié la cinétique des enzymes, caractérisé les propriétés de la surface des cellules bactériennes et analysé la glycosylation bactérienne, l'ajout post-traductionnel subtil de groupements de sucres aux protéines qui affectent la dynamique des protéines. Gerald Posch a mis son expertise en ingénierie de la glycosylation au service du développement de vaccins lors de ses recherches postdoctorales à l'Université d'Alberta et dans l'industrie biopharmaceutique pendant 5 ans, avant de rejoindre INTEGRA. Grâce à son sens du détail et à des entretiens avec des chercheurs à l'avant-garde de la découverte de médicaments, le biotechnologue et l'équipe d'INTEGRA ont mis au point le distributeur de réactifs WELLJET, une solution innovante qui permet de simplifier les tâches fastidieuses liées à la distribution des réactifs pour les tests courants, tels que le test MTT. 

Gerald Posch

En quoi un distributeur de réactifs améliore-t-il les données du test MTT ? 

La distribution des cellules et des différentes solutions qui composent un test MTT doit être très homogène, ce qui est impossible lors d'une préparation manuelle par simple pipetage. Une solution de distribution automatisée favorise la reproductibilité et l'homogénéité des données. Le WELLJET utilise un système de pompe péristaltique qui achemine le liquide grâce à un rotor intégré à la pompe du distributeur. Contrairement à d'autres distributeurs de réactifs, le WELLJET utilise la cassette EasySnap™, fabriquée en silicone moulé par injection, pour garantir que chaque tube de la cassette a les mêmes dimensions. La conception de la cassette EasySnap, associée à la pompe péristaltique, permet une distribution homogène des réactifs dans les canaux de la cassette, ce qui signifie que les chercheurs peuvent être certains que le même volume correct est appliqué à chaque puits de leur plaque multipuits. Cela permet d'éliminer la variabilité d'un puits à l'autre et de garantir l'exactitude de l'expérience. Le liquide contenu dans le tuyau en silicone n'interagit pas avec les pièces de l'instrument ou de la pompe, protégeant ainsi la stérilité de l'expérience. Le WELLJET peut aspirer des liquides à partir de différents récipients sources (flacons, fioles ou encore tubes), puis distribuer le liquide sur des plaques multipuits de toute taille, de 6 à 1 536 puits. Les chercheurs peuvent ainsi adapter leur distributeur de réactifs aux besoins des différentes expériences et étapes expérimentales.

Des changements dans la viabilité des cellules peuvent affecter les résultats du test MTT. En quoi un distributeur de réactifs peut-il contribuer à optimiser la viabilité des cellules ? 

Le principal avantage est qu'il s'agit d'un processus très doux. L'aspiration des cellules à travers le tuyau en silicone exerce des forces de cisaillement très faibles, ce qui est idéal pour les lignées cellulaires fragiles. Nos cassettes de distribution se déclinent en 2 variantes : une cassette de distribution à embout large et une cassette de distribution à petit embout. La première a non seulement un embout plus large pour le tuyau en silicone, mais aussi un orifice plus grand pour la buse de distribution. Si une personne manque d'expérience en matière de distribution de réactifs parce qu'elle a toujours utilisé des pipettes et qu'elle souhaite se mettre à la distribution de cellules, nous recommandons en premier lieu d'utiliser la cassette de distribution à embout large pour assurer les meilleures conditions aux cellules, surtout si la sensibilité et la fragilité des cellules sont inconnues. Cependant, nous avons aussi des retours de clients satisfaits de la cassette à petit embout avec des lignées cellulaires fragiles et à des vitesses de distribution élevées.

Quels autres facteurs les chercheurs doivent-ils prendre en compte lors de la distribution de cellules ? 

Pour résoudre les éventuels problèmes, tout dépend du type de cellule. En général, la vitesse de distribution est primordiale. Le WELLJET peut être réglé sur 3 vitesses différentes : rapide, moyenne et lente. La vitesse rapide offre souvent de bons résultats. Si vous constatez que les cellules ne sont pas aussi viables, utilisez des vitesses plus faibles pour de meilleurs résultats. En outre, un autre levier pour résoudre les problèmes est la hauteur du module de distribution au-dessus de la plaque. Trouver la bonne hauteur ou diminuer la hauteur de distribution peut aider les chercheurs à obtenir de meilleurs résultats avec des cellules fragiles.

Comment les chercheurs doivent-ils entretenir leurs cassettes de distribution pour maximiser leur durée de vie ? 

Les cassettes sont réutilisables. La durée de vie standard en termes de plaques distribuées est de 2 000 plaques de 96 puits à 100 microlitres. Au-delà, il est recommandé de changer la cassette. INTEGRA fournit des cassettes stériles, mais pour maintenir les cassettes dans un état optimal, il est important de les nettoyer correctement après chaque campagne de distribution. Les solutions cellulaires, les tampons ou les composés distribués contiennent des cellules, des protéines et des sels qui peuvent colmater la cassette, en particulier au niveau des buses de distribution. Nous recommandons aux scientifiques de laver soigneusement la solution cellulaire avec de l'eau déminéralisée et un détergent doux. Rincez ensuite le détergent avec de l'eau pour éviter la présence de résidus de nettoyant dans le tuyau ou la cassette lors de la prochaine campagne de distribution de cellules. Après le nettoyage, il est recommandé de rincer la cassette avec un désinfectant. Les scientifiques peuvent mettre en place un programme de nettoyage pour ces étapes, et ils doivent déplacer les tuyaux dans différents récipients sources. Il ne s'agit donc pas d'un processus entièrement automatisé, nous avons néanmoins souhaité accompagner nos clients en leur permettant de définir des programmes de nettoyage pour les cassettes. Les cassettes peuvent également être stérilisées à l'autoclave.

The EasySnap dispensing cassette with features

Comment intégrer la distribution de réactifs aux flux de travail automatisés ? 

Le processus de distribution est automatisé, et avec le module de stockage, les scientifiques sont en mesure de distribuer des cellules ou des réactifs pour une pile entière de plaques. En ce sens, ces instruments sont des unités autonomes. Cependant, le WELLJET peut également s'intégrer dans des flux de travail automatisés par le biais des commandes de l'interface de programmation d'applications (API). Nous fournissons l'instrument et les commandes API qui permettent à une entreprise multisectorielle de communiquer avec notre système. Celles-ci déclenchent des instructions qui permettent d'utiliser l'instrument dans un système entièrement automatisé. Certaines entreprises multisectorielles associent des instruments de différents fournisseurs, qui doivent fonctionner en harmonie. Par exemple, pour un essai cellulaire complet, le WELLJET ne distribue que des cellules ou des réactifs, mais un scientifique peut également avoir besoin d'une lecture optique ou d'étapes d'incubation entre les distributions de réactifs. Ces opérations peuvent être réalisées à l'aide d'un bras robotisé et d'un logiciel maître, fourni par une entreprise multisectorielle. Le bras robotique déplace les plaques multipuits d'un instrument à l'autre et lance les processus sur les instruments. Au final, il est possible d'automatiser la totalité d'un test ou d'une plateforme de criblage de composés médicamenteux.

Pour quelles autres applications les chercheurs peuvent-ils utiliser un distributeur de réactifs ? 

Tous les tests, ou presque, impliquent de distribuer des réactifs ou de manipuler des liquides. De ce fait, les distributeurs de réactifs peuvent s'avérer utiles dans la majorité des expériences. Le WELLJET utilise des plaques conformes au format ANSI/SLAS, le format standard défini pour les plaques multipuits en termes de dimensions de la plaque et de l'agencement des différents puits. Vous pouvez commencer avec une seule plaque et passer à plusieurs plaques, puis, si un débit supérieur est nécessaire, utiliser la variante avec module de stockage. Les deux instruments sont très peu encombrants et s'intègrent aux postes de sécurité microbiologique. 

Compact, affordable, fast, and precise. The WELLJET dispenser (left) and dispenser stacker (right) will revolutionize your workflow of dispensing reagents into microwell plates.

Quelle est la caractéristique la plus innovante du distributeur de réactifs WELLJET ? 

À mes yeux, la caractéristique la plus innovante est la cassette de distribution EasySnap dotée de tuyaux en silicone moulé pour éviter le réétalonnage, ce qui réduit les coûts pour nos clients et garantit une exactitude et une précision élevée dans tous les canaux. De plus, le WELLJET se distingue des autres distributeurs de réactifs par son interface large et facile d'utilisation, alliée à une mécanique très fluide et précise. Nous avons intégré autant de technologies que possible dans un instrument très compact. C'est toujours la difficulté : concevoir un instrument aussi compact que possible sans compromettre son fonctionnement. Nous allons à la rencontre des scientifiques pour comprendre les problèmes qu'ils rencontrent avec les solutions actuelles et trouver des moyens d'améliorer ces domaines avec de nouvelles solutions. Notre objectif n'est pas simplement de mettre un nouveau produit sur le marché. Nous voulons nous assurer que ce que nous développons est également à la pointe de l'innovation. Il est très intéressant de discuter avec les clients et de découvrir comment le système les aide en termes d'efficacité, de génération de données, de fiabilité et d'homogénéité.

Pour de plus amples informations sur ce sujet, veuillez télécharger notre guide technologique pour appliquer la distribution de réactifs aux tests MTT :

Télécharger

Réalisé en collaboration avec Drug Discovery News.

, by

  • Gerald Posch, PhD

    Product Manager

    Courriel