Conseils et astuces pour améliorer l’exactitude et la précision du pipetage
Conseils et astuces pour améliorer l’exactitude et la précision du pipetage
Les laboratoires des sciences de la vie utilisent quotidiennement des pipettes. Pourtant des incohérences subsistent souvent dans la technique de manipulation des chercheurs, même lorsqu'ils suivent à chaque fois le même protocole. Cela peut impacter la qualité des données et la reproductibilité, compromettant ainsi l’intégrité des résultats. Si, en matière de manipulation des liquides, les efforts d’assurance qualité se concentrent généralement sur le calibrage, la réparation et l’entretien des pipettes, il est tout aussi important de garantir une technique de pipetage correcte et cohérente pour assurer l’efficacité des processus et le succès des projets.
Chez INTEGRA, notre équipe Application cumule des décennies d’expérience dans la manipulation des liquides. Nous avons créé cette série de vidéos pour vous fournir, à vous et à vos collègues de laboratoire, des règles générales et des conseils et astuces pour pipeter correctement. Le respect de ces simples directives vous aidera à garantir :
- L’exactitude et la précision de chaque aspiration et/ou distribution, pour une reproductibilité et une fiabilité accrues des résultats
- Un fonctionnement cohérent de vos micropipettes, mécaniques et électroniques
- Un meilleur pipetage des ‘liquides à problèmes’ – tels que les liquides visqueux ou volatiles
- Un entretien correct pour un fonctionnement de long terme
Qu’est-ce que l’exactitude et la précision et pourquoi sont-elles essentielles pour le pipetage ?
L’exactitude de pipetage désigne la proximité entre le volume effectivement distribué et la valeur fixée, alors que la précision se réfère à la constance des volumes sur plusieurs distributions. Une pipette bien entretenue vous donne la certitude de travailler avec un outil précis, mais l’exactitude de chaque distribution est fonction de l’utilisation correcte de cet outil et de l’expérience de l’utilisateur. Cette vidéo traite de l’importance de l’exactitude et de la précision du pipetage, pour vous aider à identifier les points potentiellement problématiques de vos processus et vous montrer comment de simples ajustements peuvent améliorer les résultats.
Comment savoir quand utiliser une pipette mécanique ou une pipette électronique ?
Mécanique ou électronique ? Les pipettes mécaniques peuvent être de fantastiques outils pour quelques distributions d’échantillons individuels, mais les fonctions de haut débit et de distribution répétée proposées par les pipettes électroniques peuvent aider à alléger votre charge de travail. Les pipettes électroniques sont également plus précises – car l’action du piston est contrôlée par un moteur – et plus ergonomiques, car elles nécessitent moins d’effort physique et moins de cycles d’aspiration/distribution. Cette vidéo vous aide à prendre la meilleure décision quant à l'utilisation d'une pipette mécanique ou électronique, pour chaque tâche de votre processus.
Dois-je utiliser une pipette sur toute sa plage de volume ?
Nous recommandons toujours de travailler entre 35 à 100 % de la plage de volume, quelle que soit la pipette. En effet, l’exactitude et la précision diminuent quand on passe sous le seuil de 35 % du volume maximal spécifié. Toutefois, ce n’est là que la partie émergée de l’iceberg ! Pour plus d’informations et de conseils sur le volume de pipetage, regardez cette vidéo.
Pourquoi mes pointes fuient-elles ?
Une fois aspiré, le liquide contenu dans la pointe de pipette peut commencer à s’évaporer presque instantanément du fait des différences atmosphériques entre la pointe, le liquide et l’environnement du laboratoire. Il peut en résulter une hausse de pression de l’air à l’intérieur de la pointe, entraînant une possible expulsion de liquide et donc une fuite. Ce problème est très fréquent lorsqu’on travaille avec des liquides volatiles – comme l’éthanol, l’acétone ou le chloroforme - avec des impacts très divers, allant d’une baisse de précision et d’exactitude du pipetage à la contamination de l’espace de travail. Cette vidéo présente des solutions simples pour remédier à ce problème, comme la façon de préhumidifier correctement sa pipette pour équilibrer la pression d’air et l’humidité dans la pointe.
Comment dois-je tenir la pipette pour pipeter de manière plus exacte et précise ?
Manipuler une pipette est une compétence qui est presque une seconde nature pour la majorité des chercheurs, mais les mauvaises habitudes peuvent impacter la précision et l’exactitude générales. Cela peut avoir des répercussions importantes sur les résultats.
Heureusement, il est facile d'améliorer sa technique de pipetage et cela peut se faire instantanément. Par exemple, saviez-vous qu’il est important de conserver autant que possible le même angle de tenue de la pipette ? Ou que, pour les très faibles volumes inférieurs à 50 μl, il faut absolument tenir la pipette à la verticale ? Retrouvez tous ces éléments, ainsi que des démonstrations en conditions réelles, dans cette vidéo.
La profondeur d'immersion de ma pipette dans le liquide a-t-elle de l’importance lors de l’aspiration ?
En un mot, oui. La profondeur d’immersion de la pointe de pipette est cruciale, car plus elle est profondément immergée dans le liquide source, plus il y a de chance que l'excès de liquide adhère à l’extérieur de la pointe. Cela peut avoir pour effet qu’on aspire un peu plus de liquide que souhaité, avec des impacts négatifs sur vos processus et vos résultats, surtout lors du pipetage de très faibles volumes. Idéalement, la pointe ne doit être immergée que de 2 à 3 mm dans le liquide source pour l’aspiration, en utilisant la paroi du récipient pour vous guider. Il y a toutefois des exceptions à cette règle, que vous découvrirez en regardant cette vidéo.
Après la distribution, il reste une goutte sur ma pointe. Que dois-je en faire ?
Une goutte de liquide peut se former à l’extrémité de la pointe après la distribution. Elle fait partie du volume de liquide cible et doit être ajoutée au liquide déjà distribué. Cela nécessite un ‘effleurement de pointe’ ou ‘effleurement latéral’ – mais il y a trois manières de le réaliser. Regardez la vidéo pour savoir laquelle utiliser pour votre application.
Comment dois-je pipeter des liquides très visqueux ?
C'est sans doute l’une des tâches de pipetage les plus critiques pour les laboratoires des sciences de la vie. Il faut d'abord pipeter à une vitesse plus lente et faire une pause avant de terminer chaque aspiration ou distribution. Il est également judicieux d'utiliser la technique du pipetage inversé – aspirer plus de liquide que nécessaire, distribuer le volume souhaité puis jeter le petit volume post-distribution restant.
Comment dois-je pipeter des liquides volatils ?
Pipeter des liquides volatiles implique aussi de modifier légèrement votre technique pour vous assurer de ne pas sous-distribuer. En effet, les liquides volatils s’évaporent bien plus rapidement, ce qui peut entraîner des pointes qui fuient et une perte de liquide entre l’aspiration et la distribution. Le meilleur moyen de l’éviter est de préhumidifier votre pointe avec le liquide que vous vous apprêtez à pipeter. Cela permet d'équilibrer la pression d’air et l’humidité à l’intérieur de la pointe. Il est également pertinent de pipeter plus vite après l’aspiration que vous ne le feriez normalement – afin de distribuer votre liquide aussi rapidement que possible dans le récipient cible. Le pipetage inversé, enfin, peut également être utile. Il y a toutefois des exceptions à cette règle. Regardez cette vidéo pour en savoir plus !
Ai-je un quelconque moyen d’augmenter mon exactitude et ma précision lors de la distribution répétée avec une pipette électronique ?
Dans le cas d'une distribution répétée, il est recommandé de toujours jeter les premières et dernières aliquotes. Et ce, parce que le mécanisme à l’intérieur de la pipette doit basculer du sens d’aspiration à celui de distribution, ce qui peut affecter l’exactitude de la première distribution. De même, la dernière aliquote accumule toutes les erreurs d’exactitude de distribution des autres aliquotes et peut différer du volume cible. Cette vidéo traite de tous ces points, démonstrations à l’appui.
Comment garantir que ma pipette fonctionnera aussi bien et aussi longtemps que possible ?
Un entretien régulier est le dernier impératif pour garantir le degré d’exactitude et de précision le plus élevé possible pendant toute la durée de vie de votre pipette. Il est important de la ranger correctement lorsqu'elle n'est pas utilisée, de la nettoyer, de vérifier son étanchéité et de la calibrer régulièrement. Regardez cette vidéo qui constitue un guide pratique traitant de tous ces sujets.
Ces informations vous-ont-elles été utiles ? Ces difficultés vous semblent-elles familières ? Téléchargez un poster de ces conseils et astuces à placer dans votre laboratoire !
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