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PCR纯化简介
PCR纯化的作用是至关重要的，它能够去除可能干扰下游应用的杂质，只保留目标扩增子。常用的PCR纯化方法有磁珠法和离心柱法。针对这两种方法，我们的解决方案均可提供支持，但我们更推荐使用磁珠纯化法，因为其流程更容易自动化，从而获得更长的无人值守时间，并有助于减少错误，提高结果的可重复性。
磁珠纯化法的原理
磁珠纯化法可分为三个步骤：结合、洗涤和洗脱。其中的液体处理步骤可在台式设备上实现自动化操作，省去了离心柱方案中繁琐的离心和真空过滤步骤，可优化流程的可重复性，提高通量并节省时间。
步骤1：结合
首先，将磁珠以精确的比例加入到样本中，通常为1.8倍，此比例能够有效地去除100 bp以下的DNA片段。随后将进行混合和孵育，使DNA扩增子与磁珠充分结合。再利用磁力收集结合有磁珠的扩增子，即可轻松吸取并丢弃上清液（含有引物和引物二聚体等小片段DNA），分离出核酸产物。
步骤2：洗涤
向样本中加入乙醇，充分混合并重复磁力分离步骤，即可洗去其他杂质（未反应的底物、酶及盐离子）。杂质将随乙醇被一同吸出丢弃，洗涤后的干燥步骤可确保残留溶剂完全蒸发，以防干扰下游应用。
步骤3：洗脱
最后，加入低盐洗脱缓冲液或无核酸酶水，使干燥的磁珠重悬浮并释放结合的DNA（扩增子）。再次进行磁力分离，收集洗脱物中的磁珠，即可获得高质量的纯净DNA供下游应用使用。
如何简化您的磁珠法PCR纯化流程
我们提供了多种解决方案来尽可能地减轻实验室的工作负担，并优化磁珠法PCR纯化工作流程的效率。
- MAGFLO™ PCR纯化磁珠* - MAGFLO PCR磁珠可实现更高的扩增子回收率。您可以订购1 ml免费试用装亲自体验。
- MAG模块 – 我们的磁力模块能够很好地替代传统磁力架。垂直方向上的磁体自动位移功能意味着您无需再将试管或孔板转移到磁力架上，从而消除了溢出的风险。另外，所有磁珠都将被收集至一点处，而非形成环状球团，如此即可更轻松地吸出上清。多样的适配器选项可应对各种不同的实验室器具，使磁体完美贴合样本容器，确保其能够捕获全部磁珠，获得更高的产量。如需进一步提升效率，MAG模块还能与我们的台式设备（VIAFLO 96和VIAFLO 384手持式电动移液器、ASSIST PLUS移液工作站）相结合，实现工作流程的半自动化或全自动化。
- ASSIST PLUS移液工作站 – ASSIST PLUS可以搭载我们的电动多通道移液器自动完成操作，并可整合MAG模块来实现全自动、无人值守的PCR纯化工作流程。不同于大型的液体处理工作站，这款经济的解决方案不需要任何编程知识就能设置。INTEGRA还提供了模版脚本以方便您的使用。
- VIAFLO 96和VIAFLO 384手持式电动移液器 – 我们的VIAFLO 96和VIAFLO 384移液器可实现液体转移流程的半自动化，为您提供同步移取96或384个样本的能力。配合MAG模块，这些平台将成为执行高通量全板磁珠纯化工作流程的理想选择。我们的应用纪要《利用高通量磁珠法PCR纯化流程确保稳定可靠的结果产出耗时》将解答您的所有疑问。
离心柱纯化法的原理
与磁珠法工作流程相似，基于离心柱的PCR纯化流程也由结合、洗涤和洗脱三个步骤组成。离心柱中装有亲和核酸的硅胶膜，柱体插在离心管中。将样本移入离心柱后离心，即可分离出特定片段大小的DNA扩增子，它们会被膜吸附结合，而大多数杂质则会随液体穿过。重复向离心柱内加入洗涤缓冲液并离心可洗去全部杂质。最后，向柱内加入洗脱缓冲液，再次离心，从膜上释放纯化的目标DNA扩增子。
离心柱有单管和96孔硅胶膜板两种形式，后者可以放置在真空多孔板过滤装置上，无需离心，可提升工作流程的通量。然而，与磁珠法纯化相比，离心柱法确实存在一些劣势。柱内的硅胶膜很容易堵塞，而且其最小洗脱体积更大，导致产出的DNA浓度更低。整个工作流程还包含数个手动步骤，需要操作离心或真空多孔板过滤装置，这些步骤很难实现自动化，增加了人为错误的风险。
如何简化您的离心柱法PCR纯化流程
我们提供了很多液体处理解决方案来简化您的离心柱工作流程，包括：
- VOYAGER可调枪头间距移液器 - VOYAGER移液器可一键自动调节枪头间距，您可以更轻松地将储液槽中的缓冲液移入离心柱或硅胶膜板，无需再使用单通道移液器大量重复操作。
- VIAFLO 96和VIAFLO 384 – 这些96和384通道的移液器可并行完成96孔的缓冲液移取，一次填充整块硅胶膜板，缩短了手动操作时间。阅读我们的应用纪要《利用QIAquick® 96 PCR纯化试剂盒和VIAFLO 96手持式电动移液器进行PCR产物纯化》，了解这些移液器的优势所在。
*MAGFLO PCR磁珠目前仅在奥地利、丹麦、德国、瑞典、瑞士和英国销售。
