Vérification d'étalonnage
Déterminez l'exactitude et la précision de votre pipette

Poster sur l'auto-vérification de routine de vos pipettes

Comment évoluent les performances de votre pipette d’une vérification annuelle à l’autre ? Suivez les directives ci-dessous pour effectuer un contrôle de routine et apprenez à préparer l'intervention, à effectuer les mesures et à calculer l'exactitude et la précision de votre pipette.

Si vous souhaitez, vous pouvez également télécharger les Meilleures Pratiques comme poster.

Pourquoi effectuer une vérification de routine ?

Les pipettes devraient être calibrées chaque année pour conserver leurs performances. Entretemps, il est recommandé d'effectuer un contrôle de routine rapide de vos pipettes pour vérifier leur état de fonctionnement et la fiabilité de vos résultats de pipetage lors d'expériences importantes.

Remarque : Les rappels d'étalonnage peuvent être réglés en jours ou en cycles sur les pipettes électroniques d'INTEGRA.

1. Environnement et matériels

Environnement

A l’abri des courants d’air, température constante comprise entre 15 °C et 30 °C, déviation max. de ±0,5 °C pendant les mesures.

Thermomètre

Matériels

Balance

Equipée d'un paravent et d'un piège à condensat.
Piège alternatif : 4 récipients remplis d’eau à chaque coin du paravent.

Le nombre de chiffres requis est déterminé par le volume nominal de votre pipette :

Volume nominal Chiffres (Lisibilité)
0.5 µl ≤ V < 20 µl  Balance monocanal : 6 (0.001 mg)
Balance multicanaux : 5 (0.01 mg)
20 µl ≤ V < 200 µl 5 (0.01 mg)
200 µl ≤ V ≤ 10 ml 4 (0.1 mg)
balance

Récipient de pesée

Utilisez de préférence un récipient en métal pour réduire au minimum l'accumulation de charges statiques.
Alternative : microtube de 1,5 ml

Liquide de test

Eau distillée

Pointes de pipette

Utilisez les pointes de pipette recommandées par le fabricant pour de meilleurs résultats.

Remarque : Les pointes de pipette GRIPTIPS® d’INTEGRA se fixent solidement et ne se desserrent, ne fuient, ni ne tombent jamais.

Comment les pointes de pipette GripTips s'attachent à la pipette

2. Avant de commencer

Deux heures avant le début des mesures, mettez la pipette, les pointes et le liquide de test dans la pièce où le contrôle sera effectué pour qu'ils soient en équilibre avec les conditions ambiantes.

Notez la date, la température ambiante et la pression atmosphérique. Si vous ne disposez pas d'un baromètre, recherchez la pression atmosphérique dans une station météorologique locale sur internet.

Il est très important d'utiliser des bonnes techniques de pipetage.

chronomètre et checklist

3. Contrôle de l’étanchéité

Avant d'effectuer toute mesure gravimétrique, vérifiez que la pipette ne fuit pas.

  1. Pré-humidifiez la (les) pointe(s) en aspirant et en distribuant 3 fois le volume nominal.
  2. Aspirez le volume nominal en réutilisant la (les) même(s) pointe(s).
  3. Tout en immergeant la (les) pointe(s) sur 2 mm dans le liquide, tenez la pipette à la verticale pendant 30 secondes, puis (pointe(s) toujours immergée(s)) distribuez tout le liquide restant de la (des) pointe(s).
  4. Si le niveau du liquide ne diminue pas et qu’il n’y a aucune bulle d’air, poursuivez la validation. Une diminution du niveau de liquide indique la présence d’une fuite. Contactez le fabricant pour discuter des étapes suivantes.
Pré-humidification et chronomètre

4. Mesures par méthode gravimétrique

Le récipient de pesée ne devrait pas être sec. Ajoutez un peu d’eau distillée.

Nombre de mesures

Effectuez au moins 4 mesures à 100 % et à 10 % du volume nominal. Commencez à 100 %.

Validez le premier canal et un canal médian pour les pipettes multicanaux.

Procédure des mesures par méthode gravimétrique

  1. Tarez la balance avec le récipient de pesée.
  2. Chargez une nouvelle pointe de pipette.
  3. Faites une pré-humidification (voir chapitre 3)
  4. Distribuez du liquide dans le récipient de pesée. Assurez-vous de distribuer le long de la paroi intérieure du récipient et terminez en sortant l'extrémité de la pointe le long de la paroi pour éliminer le liquide résiduel.
  5. Enregistrez la pesée dans un tableau.
  6. En utilisant la même pointe, répétez les étapes 4 à 5 au moins 4 fois. Tarez la balance après chaque lecture.
  7. Éjectez la pointe et chargez une nouvelle pointe.
  8. Répétez les étapes 1 à 7 pour le deuxième volume de test.
     
Pipette multicanaux VIAFLO avec du liquide dans premier canal et un canal médian

5. Analyse des données

1. Pour chaque mesure, convertissez les chiffres de la balance (mg) en volume (µl) en utilisant le facteur Z (table pour déterminer le facteur Z) :

pipetting poster formulaVi = Simple volume en µl
mi = Simple pesée en mg
Z = Facteur Z


Voici un exemple de conversion des chiffres de la balance pour une pipette monocanal de 100 µl :

Volume de test : 100 µl
Température : 21,5 °C
Pression atmosphérique : 101,3 kPa 

Mesure # Poids (mg)
1 100,08
2 100,10
3 100,11
4 100,22
5 100,15

Vi = 100,08 mg x 1,0032 → Vi = 100,40 µl
Vi = 100,10 mg x 1,0032 → Vi = 100,42 µl
Vi = 100,11 mg x 1,0032 → Vi = 100,43 µl
Vi = 100,22 mg x 1,0032 → Vi = 100,54 µl
Vi = 100,15 mg x 1,0032 → Vi = 100,47 µl

2. Calculez le volume moyen par volume de test et par canal en utilisant les mesures Vi calculées :

pipetting poster formula 2V = Volume moyen
n = Nombre de pesées


En utilisant les valeurs de l'exemple ci-dessus, on obtient un volume moyen de 100,45 µl :

V = (100,40 µl + 100,42 µl + 100,43 µl + 100,54 µl + 100,47 µl) / 5 → V = 100,45 µl

3. Calculez l’exactitude (erreur systématique) en % par volume de test et par canal :

pipetting poster formula 3es = Erreur systématique en %
Vs = Volume de test sélectionné


En utilisant le volume moyen calculé ci-dessus, on obtient une exactitude de 0,45 % :

es = (100 (100,45 – 100)) / 100 → es = 0,45 %

4. Calculez la précision (erreur aléatoire) en % par volume de test et par canal :

pipetting poster formula 4sr = Écart type de répétabilité
 

pipetting poster formula 4CV = Coefficient de variation en %


En utilisant les valeurs des calculs de l'exemple ci-dessus, on obtient une précision de 0,05 % :

sr = √(((100,40 – 100,45)2 + (100,42 – 100,45)2 + (100,43 – 100,45)2 + (100,54 – 100,45)2 + (100,47 – 100,45)2) / (5 – 1)) → sr = 0,05

CV = 100 (0,05 / 100,45) → CV = 0,05 %

Comparez l’exactitude et la précision avec les spécifications du fabricant. Si les valeurs calculées ne sont pas dans les spécifications, la pipette doit être étalonnée. Si la pipette a réussi la vérification de routine, elle fonctionne comme prévu.

Remarque : Les pipettes électroniques INTEGRA se calibrent facilement. Entrez simplement le volume cible et le volume réel que vous avez mesurés, puis cliquez sur Calibrer.
 

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Résumé

Voici un résumé de comment calculer l'exactitude et la précision de votre pipette pour déterminer si elle doit être étalonnée :

  1. Effectuez la vérification de routine dans un environnement à l'abri des courants d'air et avec une température constante entre 15 °C et 30 °C
  2. Préparez une balance équipée d'un paravent et d'un piège à condensat, un récipient de pesée en métal, de l'eau distillée et des pointes
  3. Deux heures avant le début des mesures, mettez la pipette, les pointes et l'eau distillée dans la pièce où le contrôle sera effectué
  4. Notez la date, la température ambiante et la pression atmosphérique
  5. Vérifiez que la pipette ne fuit pas
  6. Effectuez au moins 4 mesures gravimétriques à 100 % et à 10 % du volume nominal
  7. Calculez l'exactitude et la précision et comparez les avec les spécifications du fabricant

 

Lecture complémentaire :