1. Environnement et matériels

Environnement

A l’abri des courants d’air, température constante comprise entre 15 °C et 30 °C, déviation max. de ±0,5 °C pendant les mesures.

Matériels

Balance

Equipée d'un paravent et d'un piège à condensat.
Piège alternatif : 4 récipients remplis d’eau à chaque coin du paravent.

Le nombre de chiffres requis est déterminé par le volume nominal de votre pipette :

Volume nominal	Chiffres (Lisibilité)
0.5 µl ≤ V < 20 µl	Balance monocanal : 6 (0.001 mg) Balance multicanaux : 5 (0.01 mg)
20 µl ≤ V < 200 µl	5 (0.01 mg)
200 µl ≤ V ≤ 10 ml	4 (0.1 mg)

Récipient de pesée

Utilisez de préférence un récipient en métal pour réduire au minimum l'accumulation de charges statiques.
Alternative : microtube de 1,5 ml

Liquide de test

Eau distillée

Pointes de pipette

Utilisez les pointes de pipette recommandées par le fabricant pour de meilleurs résultats.

Remarque : Les pointes de pipette GRIPTIPS^® d’INTEGRA se fixent solidement et ne se desserrent, ne fuient, ni ne tombent jamais.

2. Avant de commencer

Deux heures avant le début des mesures, mettez la pipette, les pointes et le liquide de test dans la pièce où le contrôle sera effectué pour qu'ils soient en équilibre avec les conditions ambiantes.

Notez la date, la température ambiante et la pression atmosphérique. Si vous ne disposez pas d'un baromètre, recherchez la pression atmosphérique dans une station météorologique locale sur internet.

Il est très important d'utiliser des bonnes techniques de pipetage.

3. Contrôle de l’étanchéité

Avant d'effectuer toute mesure gravimétrique, vérifiez que la pipette ne fuit pas.

1. Pré-humidifiez la (les) pointe(s) en aspirant et en distribuant 3 fois le volume nominal.
2. Aspirez le volume nominal en réutilisant la (les) même(s) pointe(s).
3. Tout en immergeant la (les) pointe(s) sur 2 mm dans le liquide, tenez la pipette à la verticale pendant 30 secondes, puis (pointe(s) toujours immergée(s)) distribuez tout le liquide restant de la (des) pointe(s).
4. Si le niveau du liquide ne diminue pas et qu’il n’y a aucune bulle d’air, poursuivez la validation. Une diminution du niveau de liquide indique la présence d’une fuite. Contactez le fabricant pour discuter des étapes suivantes.

4. Mesures par méthode gravimétrique

Le récipient de pesée ne devrait pas être sec. Ajoutez un peu d’eau distillée.

Nombre de mesures

Effectuez au moins 4 mesures à 100 % et à 10 % du volume nominal. Commencez à 100 %.

Validez le premier canal et un canal médian pour les pipettes multicanaux.

Procédure des mesures par méthode gravimétrique

1. Tarez la balance avec le récipient de pesée.
2. Chargez une nouvelle pointe de pipette.
3. Faites une pré-humidification (voir chapitre 3)
4. Distribuez du liquide dans le récipient de pesée. Assurez-vous de distribuer le long de la paroi intérieure du récipient et terminez en sortant l'extrémité de la pointe le long de la paroi pour éliminer le liquide résiduel.
5. Enregistrez la pesée dans un tableau.
6. En utilisant la même pointe, répétez les étapes 4 à 5 au moins 4 fois. Tarez la balance après chaque lecture.
7. Éjectez la pointe et chargez une nouvelle pointe.
8. Répétez les étapes 1 à 7 pour le deuxième volume de test.
    

5. Analyse des données

1. Pour chaque mesure, convertissez les chiffres de la balance (mg) en volume (µl) en utilisant le facteur Z (table pour déterminer le facteur Z) :

V_i = Simple volume en µl
m_i = Simple pesée en mg
Z = Facteur Z

Voici un exemple de conversion des chiffres de la balance pour une pipette monocanal de 100 µl : Volume de test : 100 µl Température : 21,5 °C Pression atmosphérique : 101,3 kPa  Mesure # Poids (mg) 1 100,08 2 100,10 3 100,11 4 100,22 5 100,15 Vi = 100,08 mg x 1,0032 → Vi = 100,40 µl Vi = 100,10 mg x 1,0032 → Vi = 100,42 µl Vi = 100,11 mg x 1,0032 → Vi = 100,43 µl Vi = 100,22 mg x 1,0032 → Vi = 100,54 µl Vi = 100,15 mg x 1,0032 → Vi = 100,47 µl

2. Calculez le volume moyen par volume de test et par canal en utilisant les mesures V_i calculées :

V = Volume moyen
n = Nombre de pesées

En utilisant les valeurs de l'exemple ci-dessus, on obtient un volume moyen de 100,45 µl : V = (100,40 µl + 100,42 µl + 100,43 µl + 100,54 µl + 100,47 µl) / 5 → V = 100,45 µl

3. Calculez l’exactitude (erreur systématique) en % par volume de test et par canal :

e_s = Erreur systématique en %
V_s = Volume de test sélectionné

En utilisant le volume moyen calculé ci-dessus, on obtient une exactitude de 0,45 % : es = (100 (100,45 – 100)) / 100 → es = 0,45 %

4. Calculez la précision (erreur aléatoire) en % par volume de test et par canal :

s_r = Écart type de répétabilité
 

CV = Coefficient de variation en %

En utilisant les valeurs des calculs de l'exemple ci-dessus, on obtient une précision de 0,05 % : sr = √(((100,40 – 100,45)2 + (100,42 – 100,45)2 + (100,43 – 100,45)2 + (100,54 – 100,45)2 + (100,47 – 100,45)2) / (5 – 1)) → sr = 0,05 CV = 100 (0,05 / 100,45) → CV = 0,05 %

Comparez l’exactitude et la précision avec les spécifications du fabricant. Si les valeurs calculées ne sont pas dans les spécifications, la pipette doit être étalonnée. Si la pipette a réussi la vérification de routine, elle fonctionne comme prévu.

Remarque : Les pipettes électroniques INTEGRA se calibrent facilement. Entrez simplement le volume cible et le volume réel que vous avez mesurés, puis cliquez sur Calibrer.
 

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