Comment utiliser des pipettes sérologiques et pipeteurs

Tout laboratoire effectue chaque jour des mesures volumétriques à l’aide de pipettes sérologiques. Malgré leur simplicité, il existe des bonnes pratiques à suivre pour garantir une mesure précise et exacte des liquides, idéalement avec un pipeteur tel que le PIPETBOY GENIUS.

Commencer par les bases

Exactitude et précision

Que signifient ces deux termes ? L’exactitude fait référence à l’écart entre le volume de distribution et sa valeur donnée et se définit par la conception et la qualité de l’instrument et des consommables. La précision mesure la répétabilité – autrement dit la capacité de pipeter plusieurs aliquotes d’un volume donné avec le même résultat à chaque fois – et dépend en grande partie du respect des bonnes pratiques de pipetage.

Les pipettes sérologiques sont des outils volumétriques conçus pour le transfert exact de liquides d’un volume de quelques millilitres et généralement étalonnés avec de l’eau déminéralisée « pour distribuer » (TD, Ex) avec une exactitude de ±2 % à 20 °C. Il n’est pas possible d’améliorer cette exactitude, même avec des pratiques parfaites de manipulation des liquides. Ces outils de laboratoire essentiels sont calibrés pour tenir compte du résidu humide restant dans la pipette après le transfert du liquide, le volume aspiré étant légèrement supérieur au volume distribué. Procéder à une évacuation par soufflage est indispensable pour s’assurer que le liquide est bien distribué dans sa totalité. Un peu de liquide s’accumule ensuite à l’extrémité après la purge, mais il ne fait pas partie du volume de dépose. Il est important de comprendre que, puisque la température d’étalonnage/de référence est de 20 °C, tout écart par rapport à cette température devra être corrigé pour maintenir l’exactitude et la précision du pipetage ; les utilisateurs doivent aspirer le liquide légèrement au-dessus ou au-dessous de la graduation de la pipette pour compenser le sous-dosage ou le surdosage lors du pipetage à des températures autres que 20 °C.

Respecter les bonnes pratiques

Température

Il est important de laisser le temps au liquide de s’équilibrer avec la température ambiante avant de le pipeter, et de tenir compte de l’influence de la température sur l’expansion de l’air et du liquide. L’expansion de l’air est affectée par la température du liquide à pipeter. Plus il y aura d’air dans l’embout, plus l’influence sera importante.

Le pipetage de liquides chauds ou froids à température ambiante sans équilibrage mène à des degrés différents d’expansion de l’air dans la pipette sérologique, qui pourraient ne pas correspondre aux graduations. Dans l’idéal, la pipette, le pipeteur et le liquide doivent afficher la même température. Cela permet d’éviter les différences de température importantes entre la pipette et le liquide. La pré-humidification de la pipette en aspirant et en distribuant le liquide deux ou trois fois permet d’équilibrer l’environnement à l’intérieur de l’embout, afin de réduire l’ampleur de toute erreur.

Densité du liquide

L’aspiration d’un liquide est influencée par la densité de sa masse volumétrique (rapport masse/volume), communément appelée densité. Les pipettes sérologiques sont étalonnées avec de l’eau déminéralisée, mais peuvent être utilisées pour pipeter des liquides de densités différentes. On peut, par exemple, les utiliser pour aspirer et distribuer des fluides non aqueux d’une densité inférieure ou supérieure à celle de l’eau. Il peut être nécessaire d’aspirer plus ou moins de liquide pour compenser les différences de densité. Il est possible de contrôler le poids du volume distribué à l’aide d’une balance de laboratoire pour s’assurer de son exactitude. 

Liquides non aqueux

La technique de pipetage doit être adaptée en fonction des propriétés du liquide, telles que la viscosité et la volatilité, afin de garantir une manipulation correcte. Par exemple, sachant que les liquides volatils s’évaporent rapidement, il est judicieux d’effectuer l’aspiration et la distribution aussi vite que possible, ainsi que de pré-humidifier. L’inverse est vrai pour les liquides visqueux : il est important de prévoir un temps suffisant pour assurer une aspiration et une distribution complètes du volume requis à une vitesse lente.

Altitude

La pression de l’air varie en fonction de l’altitude géographique. Celle-ci peut avoir un impact sur les résultats si l’altitude du lieu d’utilisation de la pipette est sensiblement différente de celle du site d’étalonnage. Aspirez un petit volume d’eau défini et pesez-le sur une balance pour vérifier tout écart, et ajustez ensuite le volume distribué si nécessaire.

Le bon volume de pipette

Le volume d’air mort a un effet important sur l’exactitude du pipetage, car l’air peut se dilater avec une hausse de température. Plus le volume de distribution est faible, plus cette expansion devient importante. Choisissez la pipette la plus petite possible pour minimiser le volume d’air mort. Par exemple, utilisez une pipette de 10 ml (ou même de 5 ml avec un volume étendu) pour distribuer 8 ml de liquide. La précision des pipettes sérologiques se limite à leur plus petit incrément, qui est indiqué sur l’extrémité supérieure de la pipette. Le plus petit volume que vous pouvez distribuer est indiqué à l’extrémité supérieure de la pipette sérologique ; 1 ml en 1/100 signifie que le plus petit incrément est de 0,01 ml.

Lire le ménisque du liquide

Le ménisque décrit une courbure de la surface d’un liquide, qui peut être convexe ou concave, et qui est causée par l’interaction entre les forces d’adhésion et de cohésion du liquide et le diamètre de la pipette sérologique. Le volume correct est généralement établi en lisant le ménisque concave, où l’on aspire un peu plus de liquide que nécessaire avant de le distribuer dans la ligne de graduation. La pipette doit être tenue à la verticale, à hauteur des yeux, de façon à ce que l’anneau de graduation apparaisse comme une ligne. On lit alors le volume avec le point le plus bas du ménisque au niveau du bord supérieur de la marque de graduation. Le ménisque sera plus foncé et plus facile à lire devant un fond clair.

Trucs et astuces du pipeteur

Le pipeteur doit être configuré avant le pipetage, comme indiqué ci-dessous.

Pour les pipettes de 1 et 2 ml :

• Réglez la vitesse de pipetage au minimum pour éviter les débordements.
• En fonction du pipeteur, tournez le support en silicone dans le module stérile (nez) pour vous assurer que la pipette est bien maintenue.

Pour les pipettes de 5 à 100 ml :

• Réglez la vitesse de pipetage au maximum, ou choisissez la vitesse qui convient le mieux à votre volume de pipetage et à votre échantillon. 
• Lorsque vous travaillez avec des pipettes de 25 à 100 ml, choisissez celles qui sont dotées d’un système anti-goutte, si possible, afin de réduire le risque de déversement.

Remarque : avec les pipeteurs PIPETBOY d’INTEGRA, la vitesse d’aspiration et de distribution peut être contrôlée en appliquant une pression sur les boutons du pipeteur jusqu’à ce que la vitesse définie soit atteinte. De plus, la molette permet de régler la vitesse maximale.

Pour toutes les pipettes sérologiques

Déballez la pipette en partant du haut pour la garder stérile le plus longtemps possible, puis fixez-la au pipeteur. Plongez l’embout dans le liquide et pré-humidifiez en aspirant et en distribuant le volume total de la pipette deux ou trois fois. Aspirez un peu plus que le volume de liquide souhaité, puis essuyez l’extérieur de la pipette pour éliminer tout liquide restant. En tenant la pipette à hauteur des yeux, éliminez le volume excédentaire jusqu’à ce que le bas du ménisque atteigne la bonne graduation. Distribuez la totalité du liquide restant dans la cuve cible tout en plaçant l’embout au contact de la paroi de la cuve, puis soufflez un petit volume d’air pour assurer une distribution complète du liquide.

Remarque : les PIPETBOY d’INTEGRA permettent une distribution au goutte-à-goutte, pour un contrôle extrême et de faibles forces de cisaillement lors de travaux impliquant des cellules sensibles ou des liquides visqueux.

Réalisation de distributions répétées à l’aide d’un pipeteur

Selon l’application, il est souvent utile d’aspirer un grand volume, puis de distribuer plusieurs aliquotes plus petites. Les pipeteurs traditionnels nécessitent un contrôle visuel de la distribution des aliquotes requises en fonction des marques de graduation sur le corps de la pipette. Vous pouvez également utiliser un pipeteur doté d’un mode de distribution répétée.  Le PIPETBOY GENIUS d’INTEGRA permet aux utilisateurs de distribuer plusieurs aliquotes d’un même volume défini par l’utilisateur en appuyant sur un bouton, sans avoir besoin d’une inspection visuelle.*

*Uniquement avec les pipettes sérologiques INTEGRA.

Entretien du pipeteur pour éviter toute contamination

Nettoyez régulièrement les pipeteurs avec un chiffon humidifié avec de l’eau savonneuse ou de l’éthanol à 70 %, et remplacez le porte-pipette et le joint en caoutchouc du filtre dans le module stérile s’ils sont endommagés. Généralement, le module stérile peut être autoclavé. Le filtre hydrophobe empêche l’excès de liquide de pénétrer dans l’appareil. Il doit être remplacé tous les trois mois ou s’il a été contaminé par un débordement de la pipette. Le PIPETBOY GENIUS d’INTEGRA offre une protection contre le débordement afin de réduire le risque de devoir remplacer les filtres en raison d’un contact involontaire avec le liquide pipeté.

Remarque : des filtres de 0,2 et 0,45 µm, stériles et non stériles, sont disponibles pour l’INTEGRA PIPETBOY. Les filtres stériles de 0,2 µm sont recommandés pour les applications délicates, telles que la culture cellulaire.

Résumé

Il est important de suivre les bonnes pratiques décrites ci-dessus pour garantir un pipetage sérologique exact et précis. L’utilisation d’un pipeteur permet de mieux contrôler le niveau du liquide. Cependant, même avec les bonnes pratiques, il est impossible d’améliorer l’exactitude étalonnée de la pipette sérologique. Dans l’idéal, les pipettes sérologiques doivent être utilisées avec une aide électronique au pipetage, sachant qu’il s’agit de la manière la plus confortable d’aspirer et de distribuer ces volumes de liquide. Les pipettes sérologiques INTEGRA  ont un volume compris entre 1 et 100 ml. Chaque pipette est munie d’une graduation calibrée qui permet de lire le volume du liquide. Un code couleur permet d’identifier rapidement le volume de la pipette d’un simple coup d’œil. Les pipettes de plus grand volume** sont également dotées d’un système anti-goutte qui améliore la précision et la reproductibilité en réduisant le risque que le liquide ne s’écoule de la pipette pendant les transferts. Les pipeteurs PIPETBOY complètent ces pipettes à la perfection, afin de répondre à tous vos besoins pour un pipetage sérologique méticuleux.

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Remarque : les micropipettes sont recommandées pour la distribution de plus petits volumes. Lire « Comment utiliser les micropipettes » pour en savoir plus.

**25, 50 et 100 ml