D’abord quelques recommandations générales, valables pour toutes les tâches de pipetage :

• Maintenez la micropipette aussi droite que possible à chaque étape du pipetage.
• N’immergez pas la pointe de pipette trop profondément dans le réservoir d’échantillon, pour réduire le risque de contamination entre les échantillons.
• Ajustez la vitesse de pipetage en fonction du liquide.

Si vous souhaitez plus de détails sur les meilleures pratiques de pipetage, un aperçu général est disponible ici.

Pipetage des liquides non aqueux

Alors, que peut-on faire ? Dans les cas où un seul type de solution non aqueuse est pipeté, il est possible de calibrer la pipette en fonction de ce liquide pour améliorer les résultats. Toutefois, l’expérience et la technique de l’utilisateur, y compris son impression subjective des vitesses de pipetage manuel, peuvent avoir une influence significative sur le pipetage de ces liquides et sont souvent un facteur sous-estimé.

Chez INTEGRA, les solutions non aqueuses les plus répandues ont été testées avec nos pipettes. Vous trouvez ci-dessous une explication des défis liés à ce type de liquides, des recommandations de meilleure pratique sur la façon de les manipuler et les réglages optimaux pour nos pipettes électroniques. En suivant ces recommandations, vous devriez être à même de paramétrer plus rapidement votre micropipette en obtenant les meilleurs résultats avec moins de tests (même s’il peut être nécessaire de procéder à des optimisations complémentaires pour certains processus spécifiques).

Comment pipeter les liquides visqueux

DMSO

Le diméthylsulfoxyde (DMSO) est communément utilisé comme agent cryoprotecteur dans les cultures cellulaires ou pour prévenir la formation de structures secondaires dans les modèles d’ADN ou les apprêts lors des tests PCR. Les recommandations suivantes peuvent améliorer l’exactitude du pipetage de DMSO visqueux avec les pipettes VIAFLO :

• Utilisez des pointes à faible rétention car les liquides visqueux adhèrent aux parois de la pointe et rendent plus difficile l’expulsion du volume total de liquide
• Utilisez le pipetage inversé car les liquides visqueux peuvent rendre plus difficile de vider entièrement la pointe. Aspirez plus de liquide que nécessaire, distribuez le volume souhaité et rejetez le reste
• Gardez un peu plus longtemps la pointe dans la solution : attendez 2 ou 3 secondes après l’aspiration et la distribution, le petit orifice de la pipette et l’élasticité de la colonne d’air pouvant sinon empêcher les échantillons visqueux d’être complètement pipetés
• Adaptez la vitesse – utilisez une vitesse de pipetage d’~450 µl/sec (Vitesse 6 sur les pipettes électroniques VIAFLO 50-1250 μl) ou moins pour les concentrations plus élevées de DMSO. Des vitesses de pipetage plus élevées peuvent être utilisées pour des concentrations de DMSO plus faibles

Glycérol

Le glycérol est généralement utilisé comme agent cryoprotecteur dans les cultures cellulaires ou comme source de carbone dans les fermentations microbiennes fed-batch. Les recommandations suivantes peuvent améliorer votre expérience de pipetage du glycérol visqueux avec les pipettes VIAFLO :

• Utilisez des pointes à embout large en particulier pour les solutions à 80 % de glycérol, car elles permettent au liquide d’entrer plus facilement dans la pointe
• Utilisez le pipetage inversé car il peut s’avérer difficile de vider complètement la pointe avec des vitesses de pipetage normales, à cause du liquide adhérant aux parois de la pointe
• Gardez un peu plus longtemps la pointe dans la solution, attendez 2 à 3 secondes après l’aspiration et la distribution, le petit orifice de la pipette et l’élasticité de la colonne d’air pouvant sinon empêcher les échantillons visqueux d’être complètement pipetés
• Adaptez la vitesse, utilisez une vitesse de pipetage d’~300 µl/sec (Vitesse 4 sur les pipettes électroniques VIAFLO 50-1250 μl). Les concentrations de glycérol plus faibles sont moins visqueuses et peuvent être pipetées à plus grande vitesse

Tween® 20

Le Tween® 20 est un agent de nettoyage usuel pour les immunoessais, car il empêche les liaisons d’anticorps non spécifiques. Les recommandations suivantes peuvent améliorer vos résultats de pipetage de Tween® 20 visqueux et moussant avec les pipettes VIAFLO :

• Utilisez des pointes à embout large, car elles permettent au liquide d’entrer plus facilement dans la pointe
• Utilisez le pipetage inversé,  pour réduire le risque d’injecter de l’air lors de l’expulsion dans l’échantillon, ce qui peut accentuer le côté moussant
• Adaptez la vitesse, utilisez une vitesse de pipetage d’~100 µl /sec (Vitesse 2 sur les pipettes électroniques VIAFLO 50-1250 μl)

Comment pipeter les liquides volatils

Ethanol

L’éthanol est utilisé pour un grand nombre d’applications, dont l’immobilisation de microbes, comme source de carbone et comme désinfectant, solvant ou précipitant pour l’ADN et l’ARN. Les recommandations suivantes peuvent améliorer la précision de votre pipetage d’éthanol volatile avec les pipettes VIAFLO :

• Pré-humidifiez les pointes avec de l’éthanol en effectuant 2 ou 3 aspirations/distributions de pipette pleine. Cela permet de saturer l’environnement intérieur de la pointe de pipette de vapeur d’éthanol, ce qui réduit l’évaporation du liquide cible. Sur les pipettes VIAFLO, le mode ‘Pipet/Mix’ est ici le mode idéal et vous pouvez le paramétrer comme première étape de pipetage dans vos programmes personnalisés
• Utilisez le pipetage inversé, pour une réduction supplémentaire des effets d’évaporation, car les éventuelles pertes se trouveront dans le rejet post-distribution et non dans le volume distribué
• Adaptez la vitesse, utilisez une vitesse de pipetage d’~1100 µl/sec (Vitesse 10 sur les pipettes électroniques VIAFLO 50-1250 μl) pour l’aspiration et une vitesse de pipetage d’~343 µl/sec (Vitesse 5 sur les pipettes électroniques VIAFLO 50-1250 μl) pour la distribution. Ces vitesses permettent au film d’éthanol recouvrant l’intérieur de la pointe de s’écouler avec le volume distribué. Les plus faibles concentrations d’éthanol, moins volatiles, peuvent être pipetées à des vitesses moindres.

Conclusions

Les liquides visqueux et volatils peuvent être problématiques à pipeter. Connaître l’échantillon peut permettre d’optimiser les réglages de la pipette en fonction des besoins spécifiques de chaque liquide, ce qui garantit l’exactitude et la reproductibilité maximales des résultats. Ces quatre exemples visent à vous donner une idée des meilleurs réglages à utiliser pour une gamme de solutions non aqueuses ; ils peuvent se transposer et s’adapter à d’autres liquides ayant des propriétés similaires ou à des pipettes ayant des gammes de volume différentes.

Lecture complémentaire :

• eBook: The ultimate guide to stress-free pipetting