Integration der Reagenziendispensierung in den MTT-Test
Integration der Reagenziendispensierung in den MTT-Test
Der MTT-Test dient zur Messung der Stoffwechselaktivität und ist ein Indikator für die Viabilität, Proliferation und Zytotoxizität von Zellen. MTT-Tests umfassen mehrere Schritte zur Dispensierung von Zellen und Reagenzien in Multiwell-Platten. Die Verwendung eines Reagenziendispensers kann dazu beitragen, die Konsistenz und Reproduzierbarkeit von Experimenten zu verbessern. Die untenstehende Infografik, die auch als Poster heruntergeladen werden kann, gibt einen Überblick über die wesentlichen Komponenten und zeigt, wie der WELLJET-Reagenziendispenser in den MTT-Test integriert werden kann.
Wesentliche Komponenten
| Komponente | Beschreibung |
|---|---|
| WELLJET-Dispenser | Der WELLJET-Reagenziendispenser und Dispenser mit Plattenstapler von INTEGRA übernehmen im Verlauf des MTT-Tests diverse Dispensierschritte. Mit dem WELLJET können die Zellen vorsichtig in der erforderlichen Konzentration dispensiert werden. In späteren Schritten des MTT-Tests koordiniert der WELLJET-Dispenser das Dispensieren von Zellkulturmedium, MTT-Lösung und DMSO über mehrere Multiwell-Platten. |
| EasySnapTM-Dispensierkassetten | Die WELLJET EasySnap-Dispensierkassetten verfügen über geformte Silikonschläuche mit konsistenten Abmessungen. Dies ermöglicht das hochpräzise Dispensieren von Volumina über verschiedene Kanäle und Experimente hinweg. Die EasySnap-Dispensierkassetten sind für maximale Flexibilität bei den Protokollen in 8- und 16-Kanal-Ausführung erhältlich. |
| Zellkulturmedium | Um die Lebensfähigkeit der Zellen zu optimieren, sollte das ideale Zellkulturmedium für den jeweiligen Zelltyp verwendet werden. |
| MTT-Lösung | Zu Beginn des Tests wird das MTT in PBS verdünnt. Die Lösung nimmt eine charakteristische gelbe Färbung an. Die Mitochondrien in den lebenden Zellen wandeln das MTT in Formazan-Kristalle um. Bei diesem Vorgang färbt sich die Lösung violett. |
| DMSO | Nach der Inkubation mit MTT und dem Entfernen des Zellkulturmediums mit den MTT-Resten, wird den Zellen Dimethylsulfoxid (DMSO) zugegeben. Dieses löst die neu gebildeten Formazan-Kristalle auf. |
| Platten-Lesegerät | Ein Multiwell-Spektralphotometer oder Platten-Lesegerät misst die Absorbanz bei 500 – 600 nm für jeden Well. Je höher die Absorbanz bzw. je dunkler die Lösung ist, desto größer ist die Zahl der lebensfähigen, stoffwechselaktiven Zellen pro Well. |