Renforcez la fiabilité de vos dilutions en série dans trois applications clés
Un pipetage précis pour des résultats fiables
Les dilutions en série sont utilisées pour déterminer la concentration d’un échantillon, par exemple ADN, ARN, produits PCR, protéines ou micro-organismes. Elles permettent également d’obtenir la concentration souhaitée d’un réactif, d’une substance chimique ou d’un composé, comme c’est le cas lors du processus de découverte de médicaments dans le secteur de la pharmacologie. Les dilutions en série peuvent sembler simples à réaliser au premier abord, mais la moindre variation de vitesse de pipetage, d’angle ou de mélange de pipetage lors de la manipulation manuelle des liquides peut facilement entraîner une accumulation d’erreurs tout au long du flux de travail, ce qui a un impact négatif sur la fiabilité des résultats finaux. Le pipetage manuel peut aussi être lent, ce qui prolonge le délai d’attente du résultat. Par ailleurs, les postures inconfortables, le poids des pipettes, la résistance des boutons des pistons et les processus ultra-répétitifs peuvent causer des microtraumatismes répétés au niveau des mains, des épaules, de la nuque et des poignets sur le long terme.
Nos solutions de pipetage ont prouvé leur capacité à augmenter le débit et à améliorer la précision des résultats finaux dans de multiples domaines scientifiques. Elles réduisent également le risque de microtraumatismes répétés en accélérant les tâches de transfert de liquides via de multiples canaux, ce qui réduit la durée pendant laquelle l’utilisateur doit tenir des pipettes ou rester dans une position assise ou debout inconfortable. Par ailleurs, les pipettes électroniques à commande manuelle d’INTEGRA ont toutes une conception ergonomique : elles sont légères et sont dotées d’une force d’éjection d’embouts minimale et d’une molette intuitive. Avec les pipettes automatisées, il n’y a plus besoin de passer par toutes les étapes manuelles de transfert des liquides, ce qui réduit la fatigue physique au niveau des mains et des poignets. Nous vous présentons ici trois applications clés pour lesquelles ces produits polyvalents garantissent des flux de travail rationalisés et reproductibles pour les dilutions en série.
Pour obtenir un guide clair et détaillé sur les dilutions en série avec des exemples concrets, de bonnes pratiques en matière de pipetage et des conseils sur certains paramètres spécifiques dans la manipulation des liquides, nous vous renvoyons vers les articles suivants :
Des courbes standards efficaces pour une validation précise des qPCR et une quantification précise des acides nucléiques
La courbe standard – également appelée courbe d’étalonnage – est un outil analytique de recherche quantitative utilisée pour déterminer la concentration d’une substance dans un échantillon inconnu. Une courbe standard est créée à partir de l’analyte à quantifier (ou d’un composé très proche) dans la fourchette visée et le test est validé en analysant des échantillons de diverses concentrations connues. Ensuite, on répète le test sur des échantillons inconnus en utilisant la courbe standard pour calculer la concentration en analyte. La quantification des acides nucléiques, par exemple, est une étape courante dans les laboratoires de biologie moléculaire et lorsqu’on l’opère par fluorimétrie, on peut comparer les mesures de fluorescence de la courbe standard et des échantillons inconnus pour déterminer la quantité d’ADN ou d’ARN présent.
Découvrez-en plus sur le mode d’emploi de la fluorimétrie et d’autres méthodes de quantification de l’ARN et de l’ADN pour déterminer la concentration, le rendement et la pureté des acides nucléiques.
Les courbes standards sont également utilisées pour valider les tests qPCR dans le cadre de la configuration d’un nouveau protocole ou d’un changement de flux de travail. Les tests qPCR sont réalisés avec un échantillon contenant une quantité connue d’ADN matrice, puis les données sont comparées à la courbe standard pour déterminer l’efficacité de la réaction du test.
La reproductibilité d’une dilution en série est essentielle pour garantir la fiabilité des résultats. Grâce à la pipette électronique ultra légère VIAFLO monocanal et au module de pipetage monocanal D-ONE associé au robot de pipetage ASSIST PLUS, vous pouvez prédéfinir la vitesse de pipetage et les paramètres de mélange pour vous assurer que chaque étape de dilution s’opère dans les mêmes conditions, quel que soit l’utilisateur ou le lot. De plus, les pipettes permettent un ajustement dynamique du volume au cours du mélange pour une flexibilité et une optimisation maximales du processus. Si vous avez besoin de préparer plusieurs courbes standards en parallèle, vous pouvez utiliser les pipettes VIAFLO multicanaux et les pipettes à écartement réglable des pointes VOYAGER. En outre, les pipettes VOYAGER permettent de réaliser directement des dilutions en série entre différents formats de matériel de laboratoire sources et cibles, ce qui réduit le nombre d’étapes de transfert de liquides et le risque d’erreurs manuelles. La diminution de ces étapes permet également d’accélérer les dilutions en série, ce qui améliore le rendement et réduit le délai d’obtention des résultats.
Une détermination infaillible de la concentration minimale inhibitrice (CMI) grâce à la reproductibilité des dilutions en série
La résistance aux antimicrobiens peut se développer naturellement à cause de mutations génétiques aléatoires chez les pathogènes concernés mais ce processus est nettement accéléré par l’utilisation non conforme ou abusive de médicaments – notamment les antibiotiques utilisés dans le domaine de la santé et de l’agriculture. Résultat : pour de nombreuses infections communes, les possibilités de traitement diminuent à vue d’œil, d’où la nécessité absolue de réaliser des tests de sensibilité aux antimicrobiens afin de prescrire, dès le départ, le traitement le plus efficace qui soit. Ce type de test est aussi la clé pour déterminer l’efficacité des nouveaux agents antimicrobiens dans le cadre du développement de médicaments.
L’une des façons de mesurer la sensibilité d’un pathogène aux antimicrobiens est de déterminer la plus faible concentration d’un antimicrobien qui inhibe sa croissance. C’est ce que l’on appelle la concentration minimale inhibitrice (CMI). Cela peut se faire en utilisant les méthodes de dilution en bouillon de culture, de dilution en gélose, ou de gradient antimicrobien. Vous trouverez ici un aperçu complet des méthodes les plus utilisées pour déterminer la CMI.
Le chargement partiel des pointes des pipettes électroniques VIAFLO 96 et VIAFLO 384 et de la pipette électronique portable MINI 96 vous permet de prérégler les hauteurs et les angles de pipetage. Il n’y a donc plus d’interventions manuelles, ce qui améliore l’uniformité des étapes de manipulation de liquides durant la détermination de la CMI. Les pipettes VIAFLO 96 et VIAFLO 384 permettent également aux laboratoires de réaliser des dilutions en série à haut rendement pour une meilleure productivité.
Les solutions automatisées de manipulation de liquides telles que le robot de pipetage ASSIST PLUS vous permettent de bénéficier d’un pipetage mains-libres hautement reproductible pour des flux de travail plus complexes. Cette plateforme simplifie les étapes de dilution en série pour accélérer le rendement et libérer du personnel, qui peut se concentrer sur d’autres tâches essentielles au sein du laboratoire, ce qui améliore sa productivité globale. Mieux encore, le robot de pipetage garantit la sécurité du personnel en supprimant le risque d’exposition à des organismes et antibiotiques dangereux durant le transfert des liquides, ainsi que le risque de microtraumatismes lié aux tâches de pipetage manuel répétitives.
Notre note d’application explique les protocoles à appliquer pour les dilutions en série automatisées avec le robot de pipetage ASSIST PLUS. Il s’agit d’une ressource précieuse pour les laboratoires désireux de rationaliser leurs flux de travail avec des méthodes de manipulation de liquides éprouvées. Découvrez comment augmenter la vitesse et la précision de vos opérations de détermination de la CMI en automatisant les étapes de pipetage des dilutions en série de facteur 2, 5 et 10 avec ASSIST PLUS.
Des dilutions en série sans effort pour la numération bactérienne
Dans le domaine de la microbiologie, les dilutions en série sont utilisées au quotidien pour estimer le nombre de cellules bactériennes contenues dans un échantillon. Bien sûr, quand elles sont présentes en fortes concentrations, il est impossible de déterminer le nombre précis de bactéries. C’est pourquoi on tente d’identifier le schéma de croissance cellulaire de l’échantillon en procédant au placage et à l’incubation des différentes étapes de dilution dans le cadre d’une dilution en série de facteur 10.
À l’inverse, quand les concentrations bactériennes sont très faibles dans un échantillon, elles ne permettent pas d’obtenir un nombre fiable de cellules viables dans le cadre de la méthode classique du comptage sur plaque. Dans ce cas, il est recommandé d’utiliser la méthode du nombre le plus probable (NPP) pour quantifier les bactéries. Des répliques de bouillon de culture liquide sont réparties entre des tubes de culture et l’on y injecte différentes quantités de l’échantillon. La croissance des bactéries se manifeste alors par un changement de couleur, un tube qui se trouble ou la formation de gaz pendant l’incubation. Ensuite, le nombre de cellules viables dans l’échantillon est déterminé sur la base de probabilités statistiques.
La pompe péristaltique de laboratoire DOSE IT garantit une distribution rapide et précise du bouillon et des échantillons dans les tubes de culture, ce qui accélère nettement les étapes de pipetage des procédures NPP. Elle présente en outre une paillasse ou des pédales en option pour un fonctionnement mains libres, mais peut aussi fonctionner à distance via un logiciel sur PC qui vous permet d’avoir plus de flexibilité pour adapter les étapes de manipulation de liquides à votre flux de travail NPP spécifique. Grâce au mode CUSTOMIZE de DOSE IT, vous pouvez créer facilement des protocoles de manipulation de liquides personnalisés sur la base de paramètres réglables tels que le volume, le débit et les répétitions, avec à la clé un pipetage reproductible entre les échantillons. Par ailleurs, cette pompe est compatible avec des tuyaux de différents diamètres (1 à 8 mm) en fonction du débit souhaité, ce qui est très pratique pour distribuer avec précision tout un éventail de volumes d’échantillons durant l’analyse NPP.
Découvrez-en plus sur la façon dont DOSE IT peut améliorer la rapidité et la précision de vos dilutions pour la numération bactérienne d’échantillons à faibles concentrations.
Des solutions polyvalentes pour répondre à tous les besoins
La dilution en série est une technique couramment utilisée dans de nombreux domaines des sciences de la vie et son exécution conforme est déterminante pour le succès des futures études. Nos solutions de manipulation de liquides permettent d’obtenir des protocoles de pipetage standards et de minimiser les erreurs humaines fréquentes dans le cadre du pipetage manuel, ce qui améliore la précision et la reproductibilité des résultats. De plus, ces produits robustes et innovants sont capables d’accélérer nettement les étapes de pipetage des dilutions en série, ce qui permet aux laboratoires de traiter davantage d’échantillons et de réduire le délai d’obtention des résultats. Autre avantage: l’automatisation des flux de travail et le fonctionnement mains libres éliminent le risque d’exposition aux substances dangereuses contenues dans les échantillons et le risque de microtraumatismes répétés à long terme lié aux tâches de pipetage fastidieuses. C’est un atout non négligeable pour les directeurs de laboratoires. Nos instruments ultra-flexibles s’adaptent facilement à de multiples applications. Ils simplifient de nombreuses opérations de manipulation de liquides et améliorent la productivité des laboratoires.
Références
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2214753515000169
https://bitesizebio.com/31470/obligate-qpcr-standard-curve/
https://www.jove.com/v/10507/serial-dilutions-and-plating-microbial-enumeration
https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1046/j.1469-0691.2003.00790.x