Les étapes du test MTT sont simples, mais les scientifiques ont rencontré des difficultés au niveau de la reproductibilité de la technique.¹ Les tests MTT impliquent de multiples étapes de distribution de cellules et de réactifs, qui peuvent rapidement s'additionner avec le nombre de plaques multipuits, introduisant potentiellement des imprécisions et une variabilité expérimentale. En outre, bien que le test MTT soit plus sûr que d'autres tests de viabilité cellulaire qui utilisent des agents radioactifs ou intercalants, le MTT peut devenir toxique pour les cellules à des concentrations élevées.¹ Les chercheurs doivent donc effectuer des tests préliminaires pour identifier la densité cellulaire et la concentration de MTT idéales pour différents types de cellules.¹ Utiliser un distributeur de réactifs pour les tests d'optimisation et pour automatiser les étapes fastidieuses de distribution sur des plaques multipuits facilite le travail des chercheurs et garantit la cohérence et la reproductibilité de l'expérience.

Pour automatiser la distribution des réactifs pour un test MTT, les chercheurs doivent prendre en compte les critères suivants pour le choix d'un instrument.

Flexibilité 

Pour développer de nouvelles thérapies, les chercheurs criblent les principaux médicaments candidats sur des centaines, voire des milliers de cellules dans des plaques multipuits. Le test MTT a été le premier test homogène de viabilité cellulaire mis au point pour le criblage à haut débit dans une plaque de 96 puits.² Que ce soit avec une pipette portable manuelle ou une pipette électronique multicanaux, l'aliquotage des cellules et des réactifs dans une plaque de 96 puits est une opération fatigante pour l'utilisateur et sujette à erreurs. Un simple distributeur de réactifs, tel que notre distributeur de réactifs WELLJET, automatise les tâches de pipetage de routine sur différents formats de plaques multipuits, de 6 à 1 536 puits. Pour répondre aux différents besoins dans le cadre d'expériences, le WELLJET utilise des cassettes de distribution à 8 ou 16 canaux capables d'aliquoter des volumes de 0,5 µl à 10 ml. Les chercheurs peuvent même contrôler la vitesse de distribution de différents liquides, notamment ceux qui contiennent des cellules, afin de maximiser la viabilité cellulaire et de répondre aux exigences de différents réactifs en matière de distribution. Cependant, l'instrument n'est pas un simple pipeteur aveugle. Les chercheurs peuvent utiliser son logiciel intuitif pour définir et enregistrer des protocoles personnalisés pour différentes tailles de plaques, ce qui permet d'accélérer les expériences répétées, de réduire le temps de recherche pratique et d'améliorer la reproductibilité des expériences. 

Espace 

De nombreux chercheurs ont tendance à penser que, pour bénéficier des avantages de l'automatisation, ils doivent investir dans un système de manipulation de liquides automatisé. Ces grands instruments semblables à des boîtes occupent un espace précieux sur les paillasses des laboratoires, autrement dédiées à la recherche. En revanche, avec ses dimensions de 20 x 46 x 29 cm, le WELLJET est l'appareil de ce type le moins encombrant dans le laboratoire et permet d'atteindre les mêmes objectifs de pipetage automatisé qu'un manipulateur de liquides. Pour les équipes de recherche travaillant à haut débit et traitant plus de 25 plaques par jour, le WELLJET existe également sous forme de module de stockage de plaques. Légèrement plus grand (46 x 46 x 63 cm), le module de stockage WELLJET distribue des liquides et empile des plaques dans une tour. Il permet aux chercheurs de libérer un espace précieux en organisant proprement les plaques distribuées, et de maximiser la productivité en permettant le criblage à haut débit de milliers d'échantillons. Les deux instruments peuvent également s'intégrer sous une hotte à flux laminaire, ce qui en fait des solutions de distribution de réactifs pratiques pour les postes de sécurité microbiologique.

Prix abordable 

Au lieu de pipettes, les distributeurs de réactifs utilisent des cassettes de distribution de réactifs constituées de tubes réutilisables pour aliquoter les solutions. Les cassettes de distribution de réactifs classiques sont fabriquées à partir de silicone extrudé. De ce fait, le diamètre interne du tuyau peut varier. Pour atténuer cette variabilité, les fabricants étalonnent chaque canal de la cassette en ajustant la tension du tuyau au cours du processus de fabrication. Avec le temps, cet étalonnage peut se perdre, ce qui oblige les chercheurs à réétalonner leurs cassettes ou à les jeter pour préserver l'exactitude scientifique. Le WELLJET utilise un type révolutionnaire de cassette de distribution, appelée EasySnap™, fabriquée à partir de tuyaux en silicone moulés par injection pour garantir que chaque tube est fabriqué aux mêmes dimensions, ce qui élimine les variations d'un canal à l'autre et la nécessité d'un nouvel étalonnage. Les cassettes EasySnap sont moins chères à l'achat et à l'utilisation, ce qui permet d'économiser des fonds précieux pour la recherche.

Facilité d'utilisation 

Les distributeurs de réactifs sont également faciles à utiliser. Le WELLJET est doté d'un grand écran et d'une interface utilisateur intuitive qui simplifient la programmation des protocoles de distribution. Les chercheurs peuvent insérer sans effort la cassette de distribution EasySnap dans l'instrument, sans craindre de la casser ou de la placer incorrectement. Les cassettes de distribution EasySnap sont également équipées d'une étiquette d'identification par radiofréquence (RFID) qui permet aux chercheurs de surveiller les volumes distribués. L'étiquette RFID des EasySnap informe les chercheurs des volumes distribués et avertit l'utilisateur lorsqu'il est temps de changer la cassette. 

Valeur réelle 

Outre le prix abordable du WELLJET, le principal avantage à utiliser un distributeur de réactifs de haute qualité est d'optimiser le temps des chercheurs. Opter pour un distributeur de réactifs pour aliquoter les liquides sur des plaques multipuits augmente la fiabilité et l'exactitude des expériences et libère du temps aux chercheurs qui peuvent ainsi effectuer des tâches expérimentales plus complexes, analyser les données et parvenir plus rapidement à de précieuses découvertes. 

Pour de plus amples informations sur ce sujet, veuillez télécharger notre guide technologique pour appliquer la distribution de réactifs aux tests MTT :

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Réalisé en collaboration avec Drug Discovery News.

Références

1. Ghasemi, M, Turnbull, T, Sebastian, S, & Kempson, I. The MTT assay: utility, limitations, pitfalls, and interpretation in bulk and single-cell analysis. Int J Sci 22(23), 12827 (2021).
2. Mosmann, T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. J Immunol Meth 65, 55-63 (1983).